СОЗДАНИЕ ОТЕЧЕСТВЕННЫХ АНТИГЕМОФИЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ ПЛАЗМЫ ДОНОРСКОЙ КРОВИ

- М.А. Ажигирова, Гематологический научный центр РАМН, г.Москва

Плазма донорской крови является сложной смесью белков (около 500 названий). К идентифицированным относят 289 белков, а с установленными лечебными свойствами – 27. Среди них такие уникальные по лечебной эффективности, как факторы свертывания, в том числе VIII и IX, иммуноглобулины, антитромбин III и целый ряд других. На их выделение с сохранением их уникальной биоголической активности и направлена деятельность отдельного звена фармацевтической отрасли по получению препаратов плазмы донорской крови.

История промышленного получения препаратов плазмы, альбумина, иммуноглобулина и фибриногена, была успешно начата 55 лет назад американским химиком E.J. Cohn разработкой разделения донорской плазмы – этой сложной биологической системы – на составные части с помощью этанола. Сегодня этот способ разделения плазмы является наиболее широко применяемым в производстве белковых препаратов крови.

Следующая по времени попытка разделения цельной плазмы на составляющие направленного терапевтического действия была сделана J. Newman в 1971 году при разморозке цельной плазмы при температурах +2-40 С, что приводило к образованию осадка, названного криопреципитатом.

Однако уже 10 лет спустя в 80-х годах на 17 конгрессе Международного общества трансфузиологов (ISBT) было проведено широкое обсуждение возможности использования хроматографических методов фракционирования плазмы для получения препаратов плазмы. Причем, большое внимание уделялось не только выделению таких минорных белков плазмы как факторы VIII и IX, но и технологической схеме промышленного получения альбумина.

Опасность возможности передачи инфекций трансмиссивным путем при применении препаратов плазмы привели к спаду в развитии промышленности по фракционированию плазмы. В настоящее время разработаны и применяются для получения белковых лекарственных препаратов наряду с фракционированием плазмы донорской крови такие альтернативные способы, как генноинженерный и использование трансгенных животных. Однако развитие технологий анализа следовых количеств белков привело к пониманию того, что плазма является уникальным и еще не до конца познанным источником белков, обладающих широкими возможностями в терапии. Именно этот факт поддерживает спрос на плазму донорской крови.

Так, прогнозируемый в 2006 году общий объем переработки составляет 26 млн литров плазмы в год, а стоимость полученных при этом препаратов может составить 5.7 млрд долларов США.

В технологиях, исходящих из разделения донорской плазмы, особое внимание следует обращать на:

1. обеспечение вирусной безопасности получаемого препарата;

2. зависимость состава препарата от способа его получения;

3. структурную и функциональную идентичность белковой субстанции природному аналогу.

В настоящее время особое внимание в технологиях производства препаратов плазмы обращается на обеспечение вирусной безопасности, которое распределяется по следующим направлениям:

ъ ужесточение входного контроля сырья, поступающего на переработку, включая обследование доноров,

ъ совершенствование процессов вирусной инактивации плазмы.

Разнообразие технологических приемов разделения плазмы объясняет количество зарегистрированных препаратов свертывания крови, из которых в основе 39-и лежит фактор VIII и 32-х - фактор IX. Эта особенность антигемофильных препаратов заставляет использовать индивидуальный подход при выборе соответствующей терапии.

Наиболее распространенным технологическим решением получения лечебных препаратов на основе разделения плазмы донорской крови является сочетание стадий хроматографического фракционирования и спиртового осаждения. Стадии хроматографического разделения белков плазмы применяются при выделении минорных компонентов плазмы, содержание которых лежит в интервале 20-200 мг в литре плазмы. Последующее выделение альбумина и иммуноглобулина осуществляется с помощью этилового спирта.

Такая технологическая схема была положена в основу действующего в ГНЦ РАМН пилотного производства, где хроматография используется для получения концентратов факторов VIII и IX, а также антитромбина III. Обедненная минорными компонентами, плазма после удаления факторов свертывания подвергается спиртовому фракционированию для получения других препаратов плазмы.

Использование хроматографической стадии в технологической схеме фракционирования плазмы придает гибкость процессу производства и позволяет регулировать выпуск продукции по номеклатуре и объемам, введением или исключением той или иной ступени хроматографии, изменением объемов применяемых сорбентов, в зависимости от спроса на рынке потребления.

Гибкость хроматографических технологий позволяет разрешить проблему снижения стоимости препаратов плазмы, во-первых, получением возможно большего количества препаратов из единицы сырья, во-вторых, повысить выход белка в процессе выделения, в-третьих, сократить стадии в технологическом процессе, в том числе, объединением стадий выделения и вирусной инактивации. Эти меры теоретически должны сократить производственные потери дорогостоящих белковых субстанций получаемых лекарственных средств и повысить эффективность использования дорогостоящего уникального сырья, каковым является плазма донорской крови. Таким образом, увеличение выхода и расширение ассортимента готовой продукции влекут за собой снижение цены выпускаемых лекарственных препаратов.

Пилотное производство ГНЦ РАМН прошло стадию лицензирования на соответствие требованиям ОСТа 42-510-98 и получило лицензию на производство лекарственных средств № 64/0180-Л/03.

При организации производственного процесса в ГНЦ РАМН в основу обеспечения вирусной безопасности получаемых препаратов положена система мер, включающих обследование доноров перед донацией, последующую карантинизацию заготовленной свежезамороженной плазмы (СЗП), повторный вирусологический контроль каждой дозы пулируемой СЗП, одну или несколько стадий вирусной инактивации и вирусологический контроль готовой лекарственной формы. Технологические стадии вирусной инактивации состоят из сольвент-детергентной, предшествующей хроматографическому выделению белка, и термической, выполняемой на завершающей стадии приготовления готовой лекарственной формы. Первым национальным стандартом качества используемой для фракционирования плазмы явилась ФС 42-0091-02 «Плазма для фракционирования».

Действующая в настоящее время в ГНЦ РАМН технологическая схема пилотного производства позволяет получать два препарата свертывания крови – концентраты факторов VIII и IX (Агемфил А и Агемфил В, соответственно), и планируется введение стадии получения антитромбина III.

Агемфил В в виде лиофилизированного порошка для приготовления раствора для инфузий представляет собой концентрат протромбинового комплекса. В одной дозе препарата содержится в среднем 250 МЕ фактора свертывания крови IX, стабилизированного натрия хлоридом, натрия цитратом и глицином. Основные характеристики препарата Агемфил В включают в себя концентрацию общего белка в интервале 0,17-0,23%, удельную активность – 12-14 МЕ/мг белка, содержание факторов протромбинового комплекса X и II в расчете на 1 МЕ фактора IX в количестве 0,3 МЕ и 0,6 МЕ, соответственно. Контроль качества получаемого препарата проводится в соответствии с требованиями ФСП № 42-0403-02.

Получаемый концентрат фактора VIII (Агемфил А) обладает следующими характеристиками: содержание фактора VIII во флаконе - 250 МЕ, концентрация общего белка - 0,2-0,3%, удельная активность – 10-16   МЕ/мг белка.